在进行细胞感染实验时，以24孔培养板为例，同步进行目标细胞与工具细胞的感染预实验。工具细胞可选择293T（人胚肾上皮细胞）、H1299（人肺癌细胞）等。本实验所需材料包括培养基、24孔培养板、移液枪、枪头、EP管、细胞计数板、冰盒及废液缸等。同时，根据目标细胞的特点，酌情使用Polybrene。

Day 1: 准备细胞

将细胞培养至对数生长期后，使用胰酶进行消化计数，测定细胞密度。每孔接种5×10⁴个细胞，并添加500µL的细胞培养液。一般情况下，H1299或293T细胞在感染后第3天可达到80%-90%的融合度。在接种目标细胞时，需根据细胞实际生长速度调整接种量，以保证感染后第3天达到80%-90%的融合度。

Day 2: 感染准备

(1) 准备慢病毒颗粒：计算所需的慢病毒颗粒量，将冻存在-80℃的慢病毒颗粒取出并进行冰浴融化。

(2) 感染目标细胞：从培养箱取出细胞，使用显微镜观察细胞生长状态及融合度。如细胞状态良好，则进行下一步实验：

• A. 小心吸去24孔培养板中的旧培养液，加入新的完全培养液。
• B. 按照计算好的剂量，将慢病毒颗粒液加入细胞中，将培养板平放于工作台，以划8字的方式轻柔混匀。
• C. 混匀后，将细胞培养板置于37℃、5% CO₂培养箱中过夜培养。

Day 3: 更换培养液

感染12-16小时后，吸出含慢病毒颗粒的培养液，重新向培养板添加含5%灭活FBS（胎牛血清）的培养液，并继续培养。请根据目标细胞的特性调整感染时长，某些细胞可能无法感染超过12小时。

Day 4: 继续观察

继续培养细胞，并观察其状态是否异常。

Day 5: 评估感染效率

用70%乙醇清理24孔培养板外壁并盖紧，置于倒置荧光显微镜下观察荧光，并拍照以评估慢病毒颗粒的感染效率。若慢病毒颗粒携带的基因表达时间较长，建议在感染72或96小时后再观察荧光表达情况。

根据观察到的荧光情况，可以初步从MOI梯度中探索出目标细胞的MOI值。

在生物医学研究中，尊龙凯时致力于提供高品质的实验材料和技术支持，帮助研究者优化实验过程，提高感染效率，推动科学研究的进展。